





熒光原位雜交技(fish)原理:是利用熒光標(biāo)記的特異核酸探針與細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的靶DNA分子或RNA分子雜交,通過在熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描儀下觀察熒光信號,分子病理技術(shù)服務(wù),來確定與特異探針雜交后被染色的細(xì)胞或細(xì)胞器的形態(tài)和分布,或者是結(jié)合了熒光探針的DNA區(qū)域或RNA分子在染色體或其他細(xì)胞器中的定位。
熒光原位雜交技(fish)實(shí)驗(yàn)步驟:
1、組織固定:組織取出洗凈后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12h。
2、脫水:組織固定完成后經(jīng)梯度酒精脫水后浸蠟,包埋。
3、切片:石蠟經(jīng)切片機(jī)切片,攤片機(jī)撈片,62°烤箱烤片2h。
4、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲1苯Ⅰ 15min-二甲1苯Ⅱ 15min-無水乙醇Ⅰ 5min-無水乙醇Ⅱ 5min,風(fēng)干,DEPC水浸泡。
5、消化:根據(jù)組織固定時(shí)間長短,切片于修復(fù)液中煮沸10分鐘,自然冷卻。后基因筆畫圈,根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性,滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。


意義
免yi組織化學(xué)的臨床應(yīng)用主要包括以下幾方面:
(1)的診斷與鑒別診斷;
(2)確定轉(zhuǎn)移性的原發(fā)部位;
(3)對某類進(jìn)行進(jìn)一步的病理分型;
(4)軟組織的一般需根據(jù)正確的組織學(xué)分類,因其種類多、組織形態(tài)相像,有時(shí)難以區(qū)分其組織來源,應(yīng)用多種標(biāo)志進(jìn)行組化研究對軟組織的診斷是不可缺少的;
(5)發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶,有助于臨床方案的確定,包括手術(shù)范圍的確定。
(6)為臨床提供方案的選擇。

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