






原位雜交雜交液注意事項(xiàng):
(1)雜交液內(nèi)除含一定濃度的標(biāo)記探針外,還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等。
(2)雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加,可以減低探針與組織標(biāo)本之間的靜電結(jié)合。甲酰胺可使Tm降低,雜交液中含每1%的甲酰胺可分別使RNA:RNA,RNA:DNA,DNA:DNA的雜交溫度降低0.35℃,0.5℃和0.65℃。,所以雜交液中加入適量的甲酰胺,可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞以及標(biāo)本的脫落。硫酸葡聚糖能與水結(jié)合,從而減少雜交液的有效容積,提高探針有效濃度,以達(dá)到提高雜交率的目的(尤其對(duì)雙鏈核酸探針)。
在雜交液中加入牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等,都是為了阻斷探針與組織結(jié)構(gòu)成分之間的非特異性結(jié)合,植物原位雜交,以減低背景。

適用場(chǎng)景
1、高靈敏度地檢測(cè)蛋白-蛋白的交互作用;
2、尋找在蛋白-蛋白交互作用中起關(guān)鍵作用的結(jié)構(gòu)域或活性位點(diǎn);
3、尋找與靶蛋白相互作用的新蛋白;
4、尋找具有藥1物治1療作用的小分子多肽;
5、尋找調(diào)控蛋白質(zhì)相互作用的化合物;
6、繪制蛋白質(zhì)相互作用圖譜。
酵母雙雜交技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)
1、無需純化蛋白;
2、檢測(cè)在活1細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行,可以在一定程度上代表體內(nèi)的真實(shí)情況;
3、檢測(cè)的結(jié)果是基因表達(dá)產(chǎn)物的積累效應(yīng),因而可檢測(cè)存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時(shí)的相互作用;
4、酵母雙雜交系統(tǒng)可采用不同組織、器1官、細(xì)胞類型和分化時(shí)期材料構(gòu)建cDNA文庫,并能分析細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等多種亞細(xì)胞部位的蛋白。

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