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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)
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熒光原位雜交技（fish）原理：是利用熒光標(biāo)記的特異核酸探針與細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的靶DNA分子或RNA分子雜交，通過在熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描儀下觀察熒光信號，來確定與特異探針雜交后被染色的細(xì)胞或細(xì)胞器的形態(tài)和分布，或者是結(jié)合了熒光探針的DNA區(qū)域或RNA分子在染色體或其他細(xì)胞器中的定位。
熒光原位雜交技（fish）實驗步驟：
1、組織固定：組織取出洗凈后立即放入固定液（DEPC水配制）中固定2-12h。
2、脫水：組織固定完成后經(jīng)梯度酒精脫水后浸蠟，包埋。
3、切片：石蠟經(jīng)切片機(jī)切片，攤片機(jī)撈片，62°烤箱烤片2h。
4、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲1苯Ⅰ 15min-二甲1苯Ⅱ 15min-無水乙醇Ⅰ 5min-無水乙醇Ⅱ 5min，水稻RNA原位雜交檢測服務(wù)，風(fēng)干，DEPC水浸泡。
5、消化：根據(jù)組織固定時間長短，切片于修復(fù)液中煮沸10分鐘，自然冷卻。后基因筆畫圈，根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。
染色體原位雜交實驗的基本原理是利用特定標(biāo)記的已知堿基序列的核酸探針，依據(jù)堿基互補(bǔ)配對原理，與中期染色體玻片標(biāo)本中的同源 DNA 序列進(jìn)行雜交。
標(biāo)記可以用放1射性同位素（3H、35S、32P），然后進(jìn)行放1射自顯影；也可以用非放1射性的熒光素生物素、地1高辛，再用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察，即熒光原位雜交（fluorescent in situhybridization，F(xiàn)ISH）技術(shù)。
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第4年
